Czytelnia Medyczna » Postępy Fitoterapii » 1/2003 » Badanie wpływu Citroseptu na przeżywalność komórek nowotworowych in vitro

- reklama -

Fitomed
kosmetyki ziołowe

Ski Spa - serwis narciarski Warszawa

- reklama -

Agnieszka Galanty, Zbigniew Janeczko

Badanie wpływu Citroseptu na przeżywalność komórek nowotworowych in vitro

Examination of Citrosept influence on cancer cells vitality in vitro

Katedra i Zakład Farmakognozji CM UJ, Kraków

Summary
Citrosept – grapefruit extract, produced by Cintamani, Poland – contains different types of flavonoids. Influence of Citrosept on viability of three cancer cell lines was examined in vitro. Citrosept showed high cytotoxic activity toward melanoma B16 and sarcoma XC cell lines, while it was almost not active against prostatic carcinoma cell line MLL.

Key words: citrosept, citrus sp, flawonidy, postępy fitoterapii, ziołolecznictwo, zioła, zielarstwo, fitoterapia, medycyna, medyczne, citrosept, citrus sp, flavonoids, cytotoxicity.

Polecane książki z księgarni medycznej BORGIS:

Zdrowie na co dzień

Edukacyjne przestrzenie zdrowia

Aloes dla zdrowia u urody

Ekstrakt z grejpfruta, produkowany przez firmę Cintamani pod nazwą Citrosept, jest preparatem zawierającym, według producenta, flawonoidy oraz witaminę C. Owoce grejpfruta (Citrus paradisi), na bazie których powstaje Citrosept, stanowią bogate źródło związków flawonoidowych, będących uzupełnieniem codziennej diety. W grejpfrucie zidentyfikowano polimetoksylowane flawony, takie jak: nobiletyna, skutellareina, tangeretyna, sinensetyna czy heptametoksyflawon (8) oraz flawanony: naringeninę i jej glikozydy naringinę i narirutyinę, a także didyminę, hesperydynę, neohesperydynę i inne (8).

Związki flawonoidowe charakteryzują się wyjątkowo szerokim spektrum działania. Wykazują one właściwości uszczelniające i wzmacniające ściany naczyń krwionośnych, spazmolityczne, przeciwzapalne oraz diuretyczne (1, 5, 8), posiadają również aktywność antyoksydacyjną i cytotoksyczną (2, 3, 6, 8). Poza tym stosowane są jako środki przeciwgrzybicze, przeciwbakteryjne i przeciwwirusowe.

Dotychczas wykazano wpływ flawonoidów zarówno na wzrost, jak i na przeżywalność wielu linii komórek nowotworowych in vitro i in vivo. Badania takie były prowadzone między innymi na komórkach białaczki mysiej (5, 8) i ludzkiej (3, 4, 7), czerniaka (1, 2, 5), nowotworach piersi (9, 10), jajnika (9) i wielu innych. Badano także flawonoidy zawarte w różnych owocach rodzaju Citrus (między innymi grejpfruta) pod kątem aktywności cytotoksycznej i oddziaływania na proliferację komórek białaczki ludzkiej linii HL-60 (4, 7). Badania te wykazały hamujący wpływ flawonoidów z rodzaju Citrus na rozwój komórek nowotworowych. Jednym z mechanizmów tego działania jest apoptoza – samobójcza śmierć komórek (5).

Cel pracy

Celem pracy było wstępne zbadanie wyciągu z grejpfruta, produkowanego pod nazwą Citrosept, na przeżywalność wybranych linii komórek nowotworowych in vitro.

Materiały i metody

Aktywnośc cytotoksyczną Citroseptu badano na trzech liniach komórek nowotworowych: czerniaka mysiego melanoma B16, mięsaka mysiego sarcoma XC oraz złośliwego nowotworu prostaty szczura MatLyLu MLL. Wszystkie komórki hodowane były w inkubatorze o ściśle zdefiniowanych warunkach: 5% CO₂, 37°C, odpowiednia wilgotność. Komórki czerniaka melanoma B16 oraz mięsaka sarcoma XC hodowano w pożywce MEM (Minimum Essential Medium Eagle) z dodatkiem 10% surowicy bydlęcej oraz mieszaniny antybiotyków. Komórki nowotworowe prostaty szczura hodowane były w pożywce RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute) z dodatkiem 2% surowicy bydlęcej i mieszaniny antybiotyków.

Użyty do badań preparat Citrosept, produkowany przez firmę Cintamani Poland, jest 33% ekstraktem, uzyskiwanym z owoców grejpfruta. Obecne w ekstrakcie flawonoidy stanowią łącznie 19,37% preparatu. Jako rozpuszczalnik w preparacie zastosowano wodny roztwór glicerolu.

Badany preparat doprowadzono do odpowiedniego stężenia metodą kolejnych rozcieńczeń przy użyciu soli fizjologicznej PBS (Phosphate Buffered Saline).

Zawiesinę komórek w płynie hodowlanym przeniesiono do 24-dołkowej płytki (gęstość komórek 1,5x10⁴/dołek). Po 24 godzinach inkubacji (5% CO₂, 37°C) płyn zmieniono i dodano roztwór badanego preparatu w zakresie stężeń od 5 do 100µg/ml. Jako kontrolę przyjęto zawiesinę komórek w MEM bez dodanego preparatu. Po 24-godzinnej inkubacji (5% CO₂, 37°C) przeprowadzono barwienie błękitem trypanu, barwiącym selektywnie komórki martwe. Pod mikroskopem liczono komórki martwe (wybarwione na niebiesko) na 100 w polu widzenia. Doświadczenia przeprowadzano w trzech powtórzeniach dla każdego stężenia, jako wynik ostateczny przyjmowano średnią arytmetyczną.

Wyniki

Otrzymane wyniki badań wpływu Citroseptu na przeżywalność komórek nowotworowych linii melanoma B16 zestawiono w tabeli 1. Wskazują one, że Citrosept posiada wysoką aktywność cytotoksyczną wobec tych komórek. Wskaźnik EC₅₀ (stężenie, przy którym obserwuje się 50% śmiertelności komórek) wynosi 35 µg/ml. Wartość stężenia, przy którym zaobserwowano 100% komórek martwych wynosi 55 µg/ml. Aktywność cytotoksyczną Citroseptu wobec komórek linii B16 przedstawiono na wykresie 1. Nieco niższą aktywność cytotoksyczną wykazał Citrosept wobec komórek mięsaka linii XC (tab. 1). Wartość wskaźnika EC₅₀dla tych komórek to 45µg/ml, natomiast stuprocentową śmiertelność komórek mięsaka zaobserwowano przy stężeniu 60 µg/ml. Aktywność cytotoksyczna Citroseptu wobec komórek linii XC pokazana jest na wykresie 1. Wobec komórek prostaty MLL Citrosept wykazał nikłą aktywność cytotoksyczną w zakresie badanych stężeń (tab. 1). Wyznaczenie wartości wskaźnika EC₅₀nie było w tym przypadku możliwe. Aktywność cytotoksyczna Citroseptu wobec komórek linii MLL przedstawiona jest na wykresie 1.

Tabela 1. Aktywność cytotoksyczna Citroseptu wobec komórek czerniaka B16, mięsaka XC i nowotworu prostaty MLL.

Stężenie citroseptu (mg/ml)	Śmiertelność komórek B16 (%)	Śmiertelność komórek XC (%)	Śmiertelność komórek MLL (%)
5	0	0	0
10	0	0	0
15	5	10	0
20	10	10	0
25	20	15	0
30	40	30	5
35	50	40	5
40	65	40	5
45	70	50	5
50	90	70	10
55	100	80	10
60	100	100	10
70	100	100	10
80	100	100	10
90	100	100	20
100	100	100	20
110	100	100	20
120	100	100	20

Wykres 1. Aktywność cytotoksyczna Citroseptu wobec komórek trzech badanych linii.

Omówienie

Dane literaturowe dotyczące aktywności przeciwnowotworowej flawonoidów, także tych zawartych w rodzaju Citrus, do którego należy grejpfrut, wskazują, że związki te działają aktywnie w zakresie stężeń od 10 do 150 µg/ml. Tak duży zakres wynika z różnorodności stosowanych metod, a także oporności linii komórkowych.

Preparat Citrosept działał najsilniej na komórki czerniaka mysiego melanoma B16 (EC₅₀ 35µg/ml). Nieco niższą aktywność tego preparatu zaobserwowano dla komórek linii mięsaka mysiego XC (EC₅₀ 45 µg/ml). Wobec komórek linii prostaty szczurzej MLL Citrosept wykazał niewielką aktywność cytotoksyczną. Zestawienie wartości EC₅₀ dla badanych linii komórkowych znajduje się w tabeli 2.

Tabela 2. Porównanie wartości EC₅₀ dla badanych linii komórek nowotworowych.

	linia B16	linia XC	linia MLL
wartość EC50 (mg/ml)	35	45	-

W badaniach działania cytotoksycznego Citroseptu wartości EC₅₀ dla badanych linii komórek nowotworowych wahają się od 35 do 45 µg/ml. Uzyskane wyniki wskazują na wysoką aktywność cytotoksyczną in vitro tego preparatu w odniesieniu do przytoczonego zakresu stężeń.

Wnioski

W przeprowadzonych badaniach wpływu preparatu Citrosept na przeżywalność komórek wybranych linii nowotworowych stwierdzono wysoką aktywność cytotoksyczną tego preparatu wobec komórek linii czerniaka oraz mięsaka. Za działanie to są odpowiedzialne zawarte w preparacie flawonoidy. Uzyskane wyniki wskazują na możliwość kontynuowania badań nad Citroseptem, zarówno in vitro, jak i in vivo.

Polecane książki z księgarni medycznej BORGIS:

Odnowa na talerzu

Metody tradycyjnej chińskiej dbałości o zdrowie

Wielka księga zdrowia

Piśmiennictwo

1. Caltagirone S., et al.: Flavonoids apigenin and quercetin inhibit melanoma growth and metastatic potential. International Journal of Cancer, 2000, 15, 87:595. 2. Cushman M., Nagarathnam D.: Cytotoxicities of some flavonoid analogues. Journal of Natural Products, 1991, 54:1656. 3. Dimas K., et al.: Cytotoxic activity of kaempferol glycosides against human leukaemic cell lines in vitro. Pharmacological Research, 2000, 41:85. 4. Hirano T., et al.: Citrus flavone tangeretin inhibits leukaemic HL-60 cell growth partially through induction of apoptosis with less cytotoxicity on normal lymphocytes. British Journal of Cancer, 1995, 72:1380. 5. Iwashita K., et al.: Flavonoids inhibit cell growth and induce apoptosis in B16 melanoma 4A5 cells. Bioscienses, Biotechnology and Biochemistry, 2000, 64:1813. 6. Jagadeeswaran R., et al.: In vitro studies on the selective cytotoxic effect of crocetin and quercetin. Fitoterapia, 2000, 71:395. 7.Kawaii S., et al.: Effects of citrus flavonoids on HL-60 cell differentiation. Anticanacer Research, 1999, 19:1261. 8. Manthey J., et al.: Biological properties of Citrus flavonoids pertaining to cancer nad inflammation. Current Medicinal Chemistry, 2000, 8:13 5. 9. Miranda C.L., et al.: Antiproliferative and cytotoxic effects of prenylated flavonoids from hops (Humulus lupulus) in human cancer cell lines. Food and Chemical Toxicology, 1999, 37:271. 10. Singletary K., etal.: Effect of extrusion on isoflavone content and antiproliferative bioactivity of soy/corn mixtures. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2000, 48, 8:3566.

Postępy Fitoterapii 1/2003
Strona internetowa czasopisma Postępy Fitoterapii

Powrót na górę strony

Pozostałe artykuły z numeru 1/2003:

- reklama -

Strona główna | Reklama | Kontakt